Основні поради щодо кріоконсервації клітинних культур

Основні поради щодо кріоконсервації клітинних культур

Клітини продовжують метаболізм під час нормальної діяльності росту, що вимагає участі різних протеаз. Коли температура опускається нижче -70 ° C, протеази перестають працювати. Тому в середовищі з надзвичайно низькими температурами клітини можуть зупинити свою метаболічну діяльність та вступити в спокій, що дозволяє тривати тривалий зберігання.

1. Експериментальні матеріали

Базовий матеріал:

Основне культурне середовище

Сироватка (звичайна FBS/NBS)

Ультраулярний робочий стіл

Стерильний диметилсульфоксид (DMSO)

Стерильний розчин солі фосфатів PBS

Піпетка

Електричний піпетний пістолет

Підготовка експериментів

а) Підготовка розчину заморожування:

Загальні клітини: 55% базального середовища + 40% сироватки великої рогатої худоби (FBS/NBS) + 5% DMSO

Життєві клітини: 90% сироватки великої рогатої худоби (FBS/NBS) + 10% DMSO

Аликвота підготовленого кріоконсерваційного розчину в 15 мл центрифуг -трубки [NEST] і зберігайте при 4 ° С для подальшого використання.

(b) Підготовка клітин замерзати:

Перед заморожуванням клітин виберіть клітини з хорошим станом росту та у фазі логарифмічного росту та замініть їх свіжим середовищем 12-24 години до заморожування для підтримки стану клітин.

2. Експериментальна процедура

1. Дотримуйтесь щільності клітин заморожені, що становить приблизно 80%~ 90%. Використовуйте піпетку для аспірування старого середовища, додайте стерильний PBS для промивання клітин 1-2 рази та видаліть решту середовища в культурному середовищі.

2. Додайте відповідну кількість трипсину або травного соку, щоб трипсин входив у клітини, і помістити їх в інкубатор для травлення. Дотримуйтесь стану клітин під мікроскопом: цитоплазма відкликається, а клітини більше не з'єднані в аркушах. У цей момент додайте рішення зупинки, щоб зупинити процес травлення.

3. Акуратно мілить клітини наконечником, утворюючи суспензію клітин і центрифугуйте суспензію клітин при 1000 об / хв протягом 3-5 хвилин.

Відкиньте супернатант, додайте відповідну кількість розчину заморожування та акуратно піпетку, щоб клітини рахували рівномірно. Відрегулюйте щільність клітин за допомогою кріоконсерваційного середовища, щоб зробити кінцеву щільність 5 × 106/мл ~ 1 × 107/мл.

4. Використовуйте піпетку для відокремлення кріогенних труб відповідно до очікуваної ємності, і використовуйте автоматичну машину для обмеження для ковпачків та ущільнення.

5. Стандартна програма кріоконсервації -це швидкість охолодження від -1 ° С до -2 ° С/хв, а клітини, які слід заморозити, можуть поступово заморожувати відповідно до наступних етапів: кімнатна температура → 4 ° C (20 хв) → - 20 ° C (30 хв) → -80 ° C ° C (протягом ночі) → довгострокове зберігання в рідкому азоті.

Він також може зберігатися безпосередньо в морозилці при -80 ° С протягом ночі, а потім переносити в рідкий азот для зберігання.

Yongyue Medical-це високотехнологічне підприємство, що спеціалізується на НДДКР, виробництві та продажу біомедичних витратних матеріалів. Пайми піпетки, піпетки, ПЛР -пластина, продукти клітинної культури та інші біологічні лабораторні витратні матеріали. Yongyue Medical гідний вашої довіри та вибору! Ласкаво просимо до консультації!